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細胞凋亡的形態學檢測方法

 發布時間:2023-01-04 點擊量:113
細胞凋亡的形態學檢測方法

細胞凋亡檢測常用的儀器設備主要有 光學顯微鏡、倒置顯微鏡、熒光顯微鏡、共聚焦激光掃描顯微鏡、透射電子顯微鏡等進行觀察。

一、光學顯微鏡和倒置顯微鏡
① 未染色細胞:凋亡細胞的體積變小、變形,細胞膜完整但出現發泡現象,細胞凋亡
晚期可見凋亡小體。貼壁細胞出現皺縮、變圓、脫落。
② 染色細胞:常用吉姆薩染色、瑞氏染色等。凋亡細胞的染色質濃縮、邊緣化,核膜
裂解、染色質分割成塊狀和凋亡小體等典型的凋亡形態。
二、熒光顯微鏡和共聚焦激光掃描顯微鏡
一般以細胞核染色質的形態學改變為指標來評判細胞凋亡的進展情況。常用的 DNA 特
異性染料有:HO 33342 (Hoechst 33342),HO 33258 (Hoechst 33258), DAPI。三種種染料與
DNA 的結合是非嵌入式的,主要結合在 DNA 的 A-T 堿基區。紫外光激發時發射明亮的藍
色熒光。Hoechst 是與 DNA 特異結合的活性染料,儲存液用蒸餾水配成1 mg/ml 的濃度,使
用時用 PBS 稀釋,終濃度為10 μg/ml。DAPI 為半通透性,用于常規固定細胞的染色。儲存
液用蒸餾水配成1 mg/ml 的濃度,使用終濃度一般為10 μg/ml。
結果評判:細胞凋亡過程中細胞核染色質的形態學改變分為三期:Ⅰ期的細胞核呈波
紋狀(rippled)或呈折縫樣(creased),部分染色質出現濃縮狀態;Ⅱa 期細胞核的染色質
高度凝聚、邊緣化;Ⅱb 期的細胞核裂解為碎塊,產生凋亡小體(圖1)。
三、透射電子顯微鏡觀察
結果評判:凋亡細胞體積變小,細胞質濃縮。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的細胞
核內染色質高度盤繞,出現許多稱為氣穴現象(cavitations)的空泡結構(圖2);Ⅱa 期細胞

核的染色質高度凝聚、邊緣化;細胞凋亡的晚期,細胞核裂解為碎塊,產生凋亡小體。

      蘇州阿爾法生物提供的光學顯微鏡、倒置顯微鏡、生物顯微鏡、熒光顯微鏡、共聚焦激光掃描顯微鏡、透射電子顯微鏡等廣泛應用于細胞生物學、分子生物學、免疫生物學實驗。


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